Identificação do Local de Interação do Ciclamato dentro do Domínio Transmembranar da Subunidade do Receptor Doce Humano T1R3

O adoçante artificial ciclamato tem sabor doce para os humanos, mas não para os camundongos. Quando expresso in vitro, o receptor doce humano (um heterodímero de duas subunidades do receptor de gosto: hT1R2 + hT1R3) responde ao ciclamato, mas o receptor do camundongo (mT1R2 + mT1R3) não responde. Usando emparelhamentos de subunidades do receptor doce de espécies mistas de humanos e camundongos, determinamos que a responsividade ao ciclamato exige a forma humana de T1R3. Usando quimeras, determinamos que o domínio transmembranar de hT1R3 é necessário para que o receptor doce responda ao ciclamato. Usando mutagênese direcionada, identificamos vários resíduos de aminoácidos dentro do domínio transmembranar de T1R3 que determinam a responsividade diferencial ao ciclamato dos receptores doces humano e de camundongo. A mutagênese de varredura com alanina de resíduos previstos para alinhar uma cavidade de ligação do domínio transmembranar em hT1R3 identificou seis resíduos especificamente envolvidos na responsividade ao ciclamato. Usando modelagem molecular, encaixamos o ciclamato dentro do domínio transmembranar de T1R3. Nosso modelo prevê uma sobreposição substancial nas cavidades de ligação hT1R3 para o agonista ciclamato e o agonista inverso lactisole. O domínio transmembranar de T1R3 provavelmente desempenha um papel crítico na interconversão do receptor doce do estado basal para o estado ativo.