Detecção de microRNA: Um Método de Teste Point-of-Care Baseado em uma Amplificação Isotérmica Altamente Eficiente e Responsiva ao pH

A detecção trabalhosa e custosa de miRNAs trouxe desafios para suas aplicações práticas, especialmente para cuidados de saúde em casa, medicina militar rigorosa e o terceiro mundo. Neste trabalho, apresentamos um método de amplificação de miRNA responsivo ao pH, que permite a detecção de miRNA apenas usando um papel de teste de pH. A operação é fácil e nenhum outro instrumento caro está envolvido, tornando o método muito acessível. Em nossa estratégia, uma amplificação isotérmica altamente eficiente de miRNA é alcançada usando uma técnica de amplificação em círculo rolante em rede melhorada (NRCA). Grandes quantidades de H+ podem ser produzidas como subproduto durante a amplificação para induzir mudanças significativas de pH, que podem ser monitoradas diretamente usando um papel de teste de pH ou indicadores sensíveis ao pH. O grau de mudanças de cor depende da quantidade de miRNA, tornando possível a análise quantitativa. Como exemplo, o método é aplicado com sucesso para quantificar um miRNA (miR-21) em células cancerosas. Os resultados concordam bem com os da análise prevalente de qRT-PCR. É a primeira vez que um teste baseado em papel point-of-care (POCT) é desenvolvido para a detecção de miRNAs, o que pode promover a popularização dos miRNAs funcionando como biomarcadores para fins diagnósticos.