A tradução independente de cap do RNA mensageiro conferida pela sequência 5' do vírus encefalomielite equina polioviral melhora o desempenho do sistema híbrido de expressão vírus vaccinia/bacteriófago T7.

Um vírus vaccinia recombinante que direciona a síntese da RNA polimerase T7 de bacteriófago fornece a base para a expressão de genes que são regulados por promotores T7 em células mamíferas. Os transcritos T7, que representam até 30% do RNA citoplasmático total 24 horas após a infecção, são em grande parte não capped. Para melhorar a translatabilidade do RNA não capped, a região não traduzida (UTR) do vírus encefalomielite equina (EMCV) foi inserida entre o promotor T7 e o gene da acetiltransferase de cloranfenicol (CAT). Experimentos com um extrato de reticulócitos demonstraram que a UTR do EMCV conferiu translatabilidade eficiente e independente de cap ao RNA CAT sintetizado in vitro pela RNA polimerase T7. Em células infectadas com vírus vaccinia recombinantes contendo o gene CAT regulado pelo promotor T7, a UTR do EMCV aumentou a quantidade de RNA CAT em polirribossomos. O RNA CAT derivado de polirribossomos, que continha a UTR do EMCV, também foi traduzido in vitro de forma independente de cap. O uso da UTR do EMCV aumentou significativamente o sistema híbrido de expressão vaccinia/T7, resultando em um aumento de 4 a 7 vezes na atividade total de CAT. Um further improvement of approximately 2-fold was achieved by incubating the cells in hypertonic medium, which favors the translation of uncapped picornavirus RNA over cellular mRNAs. Com este sistema de expressão recém-modificado, CAT foi a proteína predominante sintetizada pelas células infectadas e, dentro de 24 horas, representou mais de 10% da proteína total da célula.