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A fixação de nitrogênio por microrganismos intestinais é um dos aspectos cruciais da simbiose em cupins que se alimentam de madeira, uma vez que esses cupins prosperam em uma dieta pobre em nitrogênio. Para entender a evolução dessa simbiose, analisamos o gene estrutural da nitrogenase nifH nas comunidades microbianas intestinais. Em conjunto com as sequências publicadas, comparamos aproximadamente 320 sequências de proteínas NifH funcionalmente putativas obtidas de um total de 19 amostras de cupins que representam todos os principais ramos de sua filogenia proposta atualmente, e de uma espécie de barata Cryptocercus que compartilha um ancestral comum com cupins. Usando técnicas multivariadas para agrupamento e ordenação, uma filogenia das sequências de proteínas NifH foi criada e plotada de várias formas com famílias, gêneros e espécies de cupins hospedeiros. Uma concordância próxima foi observada entre as comunidades NifH e os cupins hospedeiros no nível de gênero, mas as relações no nível da família nem sempre foram congruentes com a estrutura do clado aceita para os cupins. Os grupos de hospedeiros examinados incluíram famílias basais (Mastotermitidae, Termopsidae, Kalotermitidae, além de Cryptocercus), a família de cupins inferiores mais derivada Rhinotermitidae e subfamílias representando a avançada e altamente diversa família apical Termitidae (Macrotermitinae, Termitinae e Nasutitermitinae). Essa seleção abrangeu os principais estilos de nidificação e alimentação reconhecidos em cupins, e ficou evidente que a divergência filogenética do NifH, bem como a ocorrência de NifH do tipo nitrogenase alternativa, dependia, em certa medida, do estilo de vida do hospedeiro, assim como da posição filogenética.
Yamada et al. (2007) estudaram essa questão.