Análise da transformação do adenovírus tipo 5 com uma linha celular de embrião de rato clonado (CREF).

Uma linha celular clonal recentemente isolada de fibroblastos de embrião de rato Fischer (CREF) pode ser transformada com alta frequência pelo adenovírus sorotipo 5 (Ad5). As células CREF apresentam um cariótipo quase diploide, não se entrelaçam na confluência, podem ser mantidas em confluência por mais de 7 semanas a 36 graus C, e não formam colônias macroscópicas quando semeadas em ágar. As células transformadas são identificadas por sua morfologia alterada e pela presença de sequências de DNA do adenovírus nos transformantes, que podem ser demonstradas pela lise das células diretamente em filtros de nitrocelulose e hibridização com DNA de Ad5 marcado com 32P (hibridação em ponto). A frequência de transformação a 36 graus C é aproximadamente igual a 2 x 10(-4) com Ad5 selvagem e aproximadamente igual a 2 x 10(-3) com o mutante sensível à temperatura H5ts125. A análise de hibridação por Southern blot indica que cinco de seis clones CREF transformados com Ad5 selvagem e seis de seis clones transformados com H5ts125 isolados a 36 graus C contêm o genoma Ad5 integrado completo. A caracterização preliminar de quatro clones transformados (dois selvagens e dois H5ts125) indica que, embora a transformação tenha sido feita em células CREF (uma linha celular clonal), elas diferem em suas propriedades biológicas, como densidade de saturação e dependência de ancoragem.