Clonagem e caracterização física de elementos conjugativos cromossômicos em estreptococos

Usamos um método de inserção direcionada para introduzir um vetor plasmídico não replicante no grande elemento conjugativo cat-tet encontrado no cromossomo de Streptococcus pneumoniae BM6001 e suas derivações. Para direcionar a inserção preferencialmente para o elemento conjugativo, transferimos este por conjugação para Streptococcus faecalis e então usamos o DNA desta cepa como fonte de fragmentos de nuclease de restrição para ligadura com os digestos do vetor pVA891, que pode replicar em Escherichia coli, mas não em estreptococos. Esta mistura de ligadura foi usada para transformar células pneumocócicas que carregam o elemento cat-tet, com seleção para a resistência à eritromicina proporcionada pelo pVA891. Oito dessas isolados foram encontrados, e testes de transformação e conjugação mostraram que em cada caso o vetor se inseriu no elemento conjugativo, como esperado. O DNA dessas cepas pneumocócicas gerou uma variedade de plasmídeos de E. coli que fornecem ferramentas para obter um mapa de restrição detalhado e para definir outras características estruturais do elemento conjugativo estreptocócico.