Dano ao DNA e Pontos de Verificação de Replicação em Levedura de Fissão Requerem Exclusão Nuclear da Fosfatase Cdc25 via Ligação de 14-3-3

Em levedura de fissão, assim como em organismos eucarióticos superiores, a entrada na mitose é atrasada em células contendo DNA danificado ou não replicado. Isso é realizado em parte pela manutenção da fosfatase Cdc25 em uma forma fosforilada que se liga a proteínas 14-3-3. Neste estudo, geramos um mutante da Cdc25 de levedura de fissão que está severamente prejudicado em sua capacidade de se ligar às proteínas 14-3-3. A perda de ambos os pontos de verificação de dano ao DNA e de replicação foi observada em células de levedura de fissão que expressam o mutante de ligação a 14-3-3. Esses achados indicam que a ligação de 14-3-3 à Cdc25 é necessária para que as células de levedura de fissão interrompam seu ciclo celular em resposta ao dano de DNA e a bloqueios de replicação. Além disso, o mutante de ligação a 14-3-3 se localizou quase exclusivamente no núcleo, ao contrário da Cdc25 do tipo selvagem, que se localizou tanto no citoplasma quanto no núcleo. A acumulação nuclear da Cdc25 do tipo selvagem foi observada quando as células de levedura de fissão foram tratadas com leptomicina B, indicando que a Cdc25 é exportada ativamente do núcleo. A exclusão nuclear da Cdc25 do tipo selvagem foi observada após a superprodução de Rad 24, uma das duas proteínas 14-3-3 de levedura de fissão, indicando que uma função da Rad 24 é manter a Cdc25 fora do núcleo. Em apoio a essa conclusão, a superprodução de Rad 24 não alterou a localização nuclear do mutante de ligação a 14-3-3. Esses resultados indicam que a ligação a 14-3-3 contribui para a exclusão nuclear da Cdc25 e que a exclusão nuclear da Cdc25 é necessária para uma resposta normal do ponto de verificação tanto ao DNA danificado quanto ao não replicado.