Estimativa dos pesos moleculares de proteínas por filtração em gel de Sephadex

Quando uma mistura de moléculas é passada por uma coluna de grânulos de gel poroso, as moléculas podem aparecer no efluente em ordem de tamanho decrescente. A fracionamento é considerado ocorrer quando a difusão das moléculas nos poros do gel é restrita, mas não evitada devido ao seu tamanho, e porque elas passam pela coluna a taxas que são inversamente relacionadas ao volume do fluido acessível a elas dentro da coluna. Lathe & Ruthven (1956) sugeriram que as dimensões de proteínas e moléculas de polissacarídeos poderiam ser estimadas por essa técnica, agora amplamente conhecida como filtração em gel. No entanto, a avaliação de sua sugestão é difícil devido à incerteza sobre o tamanho e a forma de macromoléculas em solução (Schachman, 1960). Embora o peso molecular seja improvável de ser uma boa aproximação para o tamanho ao comparar moléculas tão dissimilares como proteínas e polissacarídeos, a correlação entre pesos moleculares e o comportamento de filtração em gel de dextranas (Granath & Flodin, 1961) indica que, para uma série homogênea de macromoléculas, tamanho e peso molecular estão intimamente relacionados. Andrews (1962) obteve evidências de experimentos com colunas de gel de ágar que isso também era verdadeiro para várias proteínas, e mostrou que a filtração em gel pode ser usada como um método comparativo para fornecer estimativas úteis dos pesos moleculares de proteínas.