Amplificação de ácidos nucleicos específicos de rinovírus a partir de amostras clínicas usando a reação em cadeia da polimerase

Descrevemos um novo método para a detecção de rinovírus humanos em amostras clínicas, utilizando a reação em cadeia da polimerase. Dois primers de oligonucleotídeos sintéticos foram produzidos que se ligam na região não codificante 5' de todos os sorotipos de rinovírus testados, cerca de 350 nucleotídeos de distância, e foram utilizados para iniciar a amplificação por reação em cadeia da polimerase do trecho de DNA interveniente. O produto desta reação, que pode ser visualizado claramente por eletroforese em gel, é uma banda discreta de 380 bp, cuja ocorrência é diagnóstica da presença de um rinovírus na amostra clínica analisada. A técnica, que é rápida, sensível e confiável, tem sido utilizada com sucesso para todos os diferentes sorotipos de rinovírus testados até agora em nosso laboratório. No entanto, a sensibilidade da detecção depende muito da inclusão de ambos os tRNA e complexos de vanádilo durante o processo de extração de RNA viral. Usando essa técnica, em condições ideais, conseguimos detectar o vírus em amostras clínicas com títulos tão baixos quanto TCID50 10(2,5).