Ativação da proteína quinase p34cdc2 pela microinjeção de cdc25C humano em células de mamíferos. Necessidade de fosforilação prévia de cdc25C por p34cdc2 em locais fosforilados na mitose.

A proteína cdc25C humana, uma fosfatase de tirosina específica que ativa a proteína quinase p34cdc2 na mitose, é uma fosfoproteína que apresenta aumento da fosforilação durante a transição G2-M. In vitro, a proteína cdc25C é substancialmente fosforilada pela proteína quinase p34cdc2-ciclina B purificada. Dos sete locais putativos de fosforilação para a proteína quinase p34cdc2 presentes na cdc25C humana, cinco são fosforilados pela proteína quinase p34cdc2 in vitro, conforme avaliado por mapeamento de fosfopeptídeos digestos por triptina e sequenciamento de peptídeos. Esses mesmos locais também são fosforilados in vivo durante a transição G2-M em fibroblastos de mamíferos normais e foram mapeados com precisão. A cdc25C fosforilada in vitro pela proteína quinase p34cdc2 exibe uma atividade 2-3 vezes maior do que a cdc25C não fosforilada, conforme ensaiado pela ativação da proquinase cdc2 inativa. A microinjeção de proteínas cdc25C purificadas em fibroblastos vivos revela que apenas a forma fosforilada de cdc25 é altamente eficaz em ativar células G2 em prófase prematura de maneira semelhante à microinjeção da proteína quinase p34cdc2 ativa purificada. Juntos, esses dados mostram que a fosforilação multissítio de cdc25C pela proteína quinase p34cdc2-ciclina B ocorre na transição G2-M e é suficiente para induzir a autoamplificação do fator promotor de cdc2/Fase-M necessário para levar células somáticas de mamíferos à mitose.