Efeitos diferenciais da brefeldina A no transporte de proteínas secretórias e lisossômicas.

A brefeldina A (BFA) bloqueia rapidamente o transporte exocitário anterógrado através do complexo de Golgi. O tráfego retrogrado sustentado induzido pela brefeldina A causa redistribuição dos constituintes do Golgi, mas não da rede trans-Golgi (TGN), para o retículo endoplasmático (RE). No presente estudo em células HepG2, observamos um efeito diferencial da BFA no transporte do TGN de duas proteínas solúveis: alfa 1-antit tripsina como representante de proteínas secretórias e catepsina D como um protótipo de enzimas lisossômicas. O complexo de Golgi de células HepG2 é sensível à BFA, pois em minutos após sua adição quase toda a atividade de três enzimas residentes do Golgi foi recuperada no RE, como monitorado por fracionamento celular em gradientes de densidade de sacarose. De acordo com isso, a alfa 1-antit tripsina glicosilada "high mannose" foi retida ou transportada de volta ao RE. A alfa 1-antit tripsina glicosilada "complex" não foi secretada no meio nem transportada de volta ao RE. A maior parte foi retida em vesículas com densidade flutuante de Golgi. Essas vesículas continham o marcador da fase líquida endocítica peroxidase de rábano quando este foi adicionado ao meio de cultura antes da BFA, sugerindo que as vesículas derivavam do TGN. Após a adição da BFA, o compartimento tornou-se inacessível à peroxidase de rábano endocitada. Em contraste com o bloqueio do transporte da alfa 1-antit tripsina complexa, a BFA não afetou o processamento do procatepsina D complexa, sintetizada recentemente (53 kDa), para a forma madura de 31 kDa. Também não interferiu no processamento do procatepsina D endocitada. Que a catepsina D madura realmente havia chegado aos lisossomos foi verificado pelo fracionamento por gradiente de densidade de Percoll. Em conclusão, nas células HepG2, a BFA induz dois bloqueios no caminho secretório: um no nível da junção RE-Golgi e o outro no TGN. Em contraste, o transporte do complexo de Golgi para os lisossomos e da membrana plasmática para os lisossomos continuou.