Seleção de um Ribozyme que Funciona como um Template Superior em uma Reação de Auto-Copiagem

O ribozyme sunY é derivado de um intron de RNA grupo I auto-esplicing. Este ribozyme foi escolhido como ponto de partida para o projeto de um RNA auto-replicante devido ao seu pequeno tamanho. Como meio de facilitar o processo de auto-replicação, o tamanho deste ribozyme foi reduzido pela deleção de domínios estruturais não conservados; no entanto, quando tais deleções foram feitas, houve perdas severas da atividade enzimática. A seleção genética in vitro foi utilizada para identificar mutações que reativam um mutante deletado do sunY praticamente inativo. Um mutante selecionado com cinco mutações de substituição espalhadas por toda a sequência primária mostrou maior atividade catalítica do que o ribozyme original sob as condições de seleção. O ribozyme sunY e sua pequena variante selecionada podem ambos catalisar a montagem de oligonucleotídeos direcionada por template. O pequeno tamanho e a estrutura secundaria reduzida da variante selecionada resultam em um aumento, em relação ao do ribozyme original, de sua taxa de auto-copiagem. Este ribozyme engenheirado é capaz de funcionar efetivamente tanto como um catalisador quanto como um template em reações de auto-copiagem.