Interações entre a Proteína de Transferência de Triglicerídeos Microsomal e a Apolipoproteína B dentro do Retículo Endoplasmático em um Sistema de Expressão Heterólogo

Quando a apolipoproteína B (apoB) é expressa em células heterólogas, não é secretada, mas retida e degradada dentro do retículo endoplasmático (RE). Anteriormente, caracterizamos formas truncadas da extremidade carboxila da apoB expressas em células COS e mostramos que essas proteínas eram prontamente sintetizadas, mas retidas dentro do RE e degradadas, se o tamanho da proteína truncada fosse maior do que apoB 29. Abaixo desse tamanho, quanto menor o tamanho dos truncamentos da apoB, maior a extensão da secreção, embora >50% dessas proteínas menores também fossem degradadas dentro do RE. No presente estudo, demonstramos que esse defeito secretório pode ser superado pela coexpressão com a proteína de transferência de triglicerídeos microsomal (MTP); além disso, essa complementação está inversamente relacionada ao tamanho da apoB. A secreção de apoBs maiores que B29 exigiu a coexpressão de MTP e, na presença de MTP, era responsiva ao oleato. A MTP, na presença ou ausência de suplementação com oleato, teve pouco ou nenhum efeito sobre a secreção dos truncamentos mais curtos. No entanto, descobrimos que a MTP estava fisicamente associada a todas as formas de apoB intracelularmente (B13-B41). A associação de MTP com apoB 41 foi estável à lavagem com alto teor de sal, assim como a baixa acidez, sugerindo que essas interações podem ser de natureza hidrofóbica. Além da interação com MTP, também foi encontrado que a apoB estava associada à calnexina, confirmando estudos anteriores, e com proteínas portadoras do sinal de retenção KDEL. No entanto, estudos sobre a superexpressão de calnexina humana e a inibição da glicosilação por tunicamicina mostraram que a interação com calnexina não era necessária para a formação ou secreção de lipoproteínas contendo apoB 41; além disso, na presença de MTP, a associação de calnexina com apoB 41 era transitória ou ausente. Esses dados sugerem que, para a apoB atingir um estado dobrado suficiente para escapar do controle de qualidade do RE, é necessário obter lipídios neutros (fornecidos pela MTP), além de sua capacidade de mantê-los embalados como uma lipoproteína rudimentar, dependendo de seu tamanho ser maior que B29.