Novos microRNAs anti-apoptóticos 582-5p e 363 promovem a sobrevivência de células-tronco de glioblastoma humano por meio da inibição direta da Caspase 3, Caspase 9 e Bim

O glioblastoma é o tumor cerebral primário mais comum e letal. A iniciação e a recorrência do tumor são provavelmente causadas por uma subpopulação de células-tronco de glioblastoma, que podem derivar de células-tronco neurais e precursoras mutadas. Como o CD133 é um marcador de células-tronco tanto para o cérebro normal quanto para o glioblastoma, e para entender melhor a formação e a recorrência do glioblastoma, procuramos microRNAs desregulados em células-tronco de glioblastoma humano CD133+ em comparação com células-tronco neurais CD133+ isoladas do cérebro humano normal. Usando a classificação FACS de amostras celulares de baixo número de passagens seguida de análise de microarray de microRNA, encontramos 43 microRNAs que estavam desregulados em comum em três glioblastomas humanos CD133+ separados em comparação com células-tronco neurais normais CD133+. Entre eles estavam vários microRNAs não associados anteriormente ao câncer. Em seguida, verificamos os microRNAs desregulados no glioblastoma usando PCR quantitativa em tempo real e análise Taqman das amostras originais, bem como de linhagens de células tronco de GBM humano e estabelecidas e muitos espécimes humanos. Mostramos que dois microRNAs oncogênicos candidatos, miR-363 e miR-582-5p, podem influenciar positivamente a sobrevivência do glioblastoma, conforme demonstrado pela expressão forçada dos microRNAs e seus inibidores, seguida por ensaio de contagem de células, ensaio de Caspase 3/7, classificação de apoptose/fluorescência ativada por anexina V, resgate de tratamento com inibidor de microRNA com siRNA, bem como mutagênese do 3'UTR para mostrar o resgate do repórter de luciferase dos alvos mais bem-sucedidos. O miR-582-5p e o miR-363 demonstram direcionar diretamente a Caspase 3, Caspase 9 e Bim.