Cinéticas e resposta à dose de focos residuais 53BP1/γ-H2AX: Co-localização, relação com reparo de DSB e sobrevivência clonogênica

OBJETIVO: Estudos recentes revelaram que alguns focos produzidos pelo membro da família da histona 2A fosforilada X (gamma-H2AX) e pela proteína de ligação do supressor tumoral p53 1 (53BP1) que co-localizam com quebras de DNA de dupla fita induzidas por radiação (DSB) permanecem nas células por tempos relativamente longos após a irradiação e indicaram uma possível correlação entre radiosensibilidade celular e focos residuais. Neste estudo, investigamos as respostas à dose e as cinéticas para a formação de focos de 53BP1/gamma-H2AX induzidos por radiação em relação à sua co-localização, reparo de DSB e sobrevivência celular. MATERIAIS E MÉTODOS: A sobrevivência celular, DSB e focos foram analisados por meio de ensaio clonogênico, eletroforese em gel de campo pulsado (PFGE) e microscopia confocal a laser, respectivamente, em fibroblastos humanos normais (VH-10) e em uma linha celular de câncer (HeLa). A análise computacional foi utilizada para determinar tanto o número quanto a área dos focos. RESULTADOS: Mostramos que mesmo em doses de até 1 cGy, uma indução estatisticamente significativa de focos de 53BP1 é observada. Embora o número de focos tenha diminuído constantemente com o tempo pós-irradiação, a área normalizada por célula dos focos não muda dentro de uma janela de tempo de aproximadamente 4 h pós-irradiação. A co-localização de focos de gamma-H2AX e 53BP1 mostrou depender da dose e do tempo pós-irradiação. Não foram estabelecidas correlações claras entre radiosensibilidade e formação de focos porque a resposta à dose para focos de 53BP1/gamma-H2AX pode depender do tempo após a irradiação e da duração do ciclo celular. Mostramos que as cinéticas do desaparecimento dos focos dentro de 24 h pós-irradiação não coincidem com as de reparo de DSB. CONCLUSÕES: Os dados sugerem que o tempo pós-irradiação utilizado para a estimativa da radiosensibilidade em doses terapêuticas relevantes baixas (por exemplo, <3 Gy) em células proliferativas, ao contar focos residuais, deve ser limitado pela duração do ciclo celular, e que a comparação direta das cinéticas de reparo de DSB e do desaparecimento dos focos co-localizando DSB não é possível. Portanto, os resultados obtidos a partir da contagem de focos devem ser interpretados com cautela em termos de reparo de DSB.