Incorporação eficiente de CoA, NAD e FAD em RNA por transcrição in vitro

As enzimas proteicas frequentemente recrutam coenzimas pequenas para realizar uma variedade de reações bioquímicas. Embora as atividades catalíticas do RNA tenham se expandido rapidamente, uma estratégia semelhante para o RNA utilizar coenzimas e aumentar suas capacidades funcionais ainda não foi demonstrada. Um procedimento geral de transcrição in vitro foi desenvolvido para preparar RNA de forma eficiente com coenzimas CoA, NAD e FAD covalentemente ligadas à extremidade 5'. Essas coenzimas contendo adenosina iniciam a transcrição sob o promotor T7 classe II pela RNA polimerase T7. Além das três coenzimas, outras moléculas contendo adenosina podem ser incorporadas na primeira posição do nucleotídeo do RNA também. Este método fornece fácil acesso a RNA-CoA, RNA-NAD e RNA-FAD, que podem encontrar amplas aplicações na geração de ribozimas que utilizam coenzimas. Além disso, tanto o FAD oxidado quanto o NADH reduzido são altamente fluorescentes. O RNA-NADH e o RNA-FAD podem, portanto, ser usados como sondas para detecção de DNA/RNA e para investigação estrutural da função do RNA por espectroscopia de fluorescência.