Caracterização estrutural e funcional de uma mutação de splicing no gene do colágeno pro-alfa 2(I) de um paciente com síndrome de Ehlers-Danlos tipo VII.

Uma mutação de splicing no gene do colágeno pro-alfa 2(I) de um paciente com síndrome de Ehlers-Danlos tipo VII foi caracterizada. A microsequência de proteínas de peptídeos preparados do colágeno dérmico do paciente identificou uma deleção intersticial de 18 resíduos. O segmento deletado corresponde ao domínio da junção do telopéptido amino-terminal codificado pelo sexto exon do gene do colágeno pro-alfa 2(I). O sequenciamento de clones de cDNA especificamente primados confirmou a presença de duas populações distintas de mRNAs pro-alfa 2(I), uma normal e outra que carece das sequências do exon 6. O sequenciamento limitado de clones genômicos mostrou que um dos alelos pro-alfa 2(I) exibe uma mudança conservadora no sétimo códão do exon 6 (GAC por GAT) e uma substituição de base na posição +1 do intron 6 (A por G). Uma vez que o transcrito normal contém o códão GAT, a mudança intrônica foi associada ao alelo que origina o mRNA pro-alfa 2(I) encurtado. Os dois fragmentos alélicos foram subclonados em um vetor de expressão e o padrão de seleção do sítio de splice para os exons 5-8 foi avaliado para cada uma das construções após a transfecção em células COS. Isso documentou a omissão das sequências do exon 6 apenas em transcritos da construção do minên gene que abriga a transição de G para A. A expressão de construções cruzadas alélicas confirmou que a substituição de uma única base na posição +1 do intron 6 é a mutação responsável pela junção anormal das sequências dos exons 5 e 7 no mRNA pro-alfa 2(I) encurtado do paciente.