Lesão Cerebral Experimental Induz Apoptose Regionalmente Distinta durante o Período Agudo e Atrasado Pós-Traumático

O padrão temporal da apoptose no cérebro de ratos adultos após lesão cerebral por percussão lateral (FP) foi caracterizado usando a coloração de extremidades por transferência mediada por desoxirribonucleotidil terminal (TUNEL) e eletroforese em gel de agarose. Ratos machos Sprague Dawley foram submetidos a lesão cerebral e sacrificados para análise histológica em intervalos de 12 horas a 2 meses após a lesão (n = 3/ponto de tempo). Controles sham (não lesionados) foram submetidos a anestesia com (n = 3) ou sem (n = 3) cirurgia. Células TUNEL-positivas apoptóticas foram definidas usando critérios morfológicos rigorosos, incluindo encolhimento e fragmentação nuclear e condensação de cromatina e citoplasma. Imunoquímica com dupla coloração foi realizada para identificar neurônios TUNEL-positivos (anticorpo monoclonal anti-neurofilamento RM044), astrócitos (anticorpo policlonal anti-proteína ácida fibrilar glial) e oligodendrócitos (anticorpo policlonal anti-fosfohidrolase de nucleotídeos cíclicos). Comparado com os controles sham, no córtex lesionado, aconteceu apoptose significativa em 24 horas (65 +/- 19 células; p < 0,05) com uma segunda resposta, mais pronunciada, uma semana após a lesão (91 +/- 24 células; p < 0,05). O número de células apoptóticas na substância branca foi aumentado já em 12 horas após a lesão e atingiu o pico em 1 semana (33 +/- 6 células; p < 0,05). Um aumento nas células apoptóticas foi observado no hipocampo em 48 horas (13 +/- 8), enquanto no tálamo, a resposta apoptótica foi atrasada, atingindo o pico em 2 semanas após a lesão (151 +/- 71 células; p < 0,05). Em 2 meses, o número de células apoptóticas na maioria das regiões havia retornado aos níveis não lesionados. Em 24 horas após a lesão, neurônios e oligodendrócitos marcados por TUNEL foram localizados principalmente no córtex lesionado. Em 1 semana após a lesão, populações de astrócitos e oligodendrócitos marcados por TUNEL estavam presentes no córtex lesionado, enquanto neurônios duplamente marcados estavam predominantemente no córtex lesionado e no tálamo, com alguns espalhados pelo hipocampo. Géis de agarose de DNA confirmaram a identificação morfológica da apoptose. Esses dados sugerem que a resposta apoptótica ao trauma é regionalmente distinta e pode estar envolvida tanto em padrões agudos quanto atrasados de morte celular.