Regulação Diferencial do Desenvolvimento e Efeitos Funcionais na Expressão Superficial do TCR Precoce Humano das Isoformas Esplicadas pTαa e pTαb

O rearranjo funcional no lócus TCRbeta leva à expressão superficial em células pré-T em desenvolvimento de um complexo pré-TCR composto pela cadeia TCRbeta emparelhada com a cadeia pré-TCRalpha invariável (pTalpha) e associada a componentes CD3. A sinalização do pré-TCR desencadeia a expansão e a diferenciação adicional das células pré-T em células T maduras TCRalphabeta, processo conhecido como seleção beta. Além do transcrito convencional de pTalpha (denominado pTalpha(a)), uma segunda isoforma esplicada alternativa do gene pTalpha (pTalpha(b)) foi descrita, cuja relevância no desenvolvimento permanece desconhecida. Neste estudo, são fornecidas evidências fenotípicas, bioquímicas e funcionais de que apenas pTalpha(a) é capaz de induzir a expressão superficial de um complexo pré-TCR associado ao CD3, que parece ser recrutado espontaneamente em balsas lipídicas, enquanto pTalpha(b) emparelha e retém TCRbeta intracelularmente. Além disso, ao usar abordagens de RT-PCR quantitativo em tempo real, mostramos que a expressão dos produtos de mRNA esplicado de pTalpha(a) e pTalpha(b) é regulada diferencialmente ao longo do desenvolvimento intratímico humano, de modo que o início transcricional de pTalpha(b) é developmentally delayed, mas a seleção beta resulta em um desligamento simultâneo de ambas as isoformas, com um aumento relativo dos transcritos de pTalpha(b) em células pré-T selecionadas em comparação com células pré-T não selecionadas in vivo. O aumento relativo de pTalpha(b) também é demonstrado ocorrer após a ativação de células pré-T in vitro. Em conjunto, nossos dados ilustram que a regulação transcricional de pTalpha limita a expressão de desenvolvimento do pré-TCR humano aos estágios intratímicos que cercam a seleção beta e são compatíveis com um papel de pTalpha(b) na formação de um complexo intracelular TCRbeta-pTalpha(b) que pode ser responsável por limitar a expressão superficial de um pré-TCR contendo pTalpha(a) e/ou pode ser competente para sinalizar a partir de um compartimento subcelular.