Expressão de uma proteína-tirosina-fosfatase de células T humanas em células renais de hamster bebê.

Uma cDNA de célula T humana codificando uma proteína-tirosina-fosfatase (PTPase; fosfohidrolase de fosfato de proteína-tirosina, EC 3.1.3.48) de 48 kDa foi clonada em um vetor de expressão de mamífero e introduzida em células renais de hamster bebê, e colônias estáveis foram isoladas. A PTPase expressa foi encontrada associada à fração particulada das células, onde estava essencialmente inativa em um ensaio in vitro, a menos que primeiro fosse submetida a uma tentativa de tripsinização limitada; o tratamento com tripsina gerou um fragmento ativo de 33 kDa pela remoção de um segmento carboxilo-terminal da enzima de comprimento total. A filtração em gel indicou que a enzima expressa estava associada a um complexo de mais de 600 kDa. A introdução de um códon de parada prematuro na cDNA da célula T na posição 1012 resultou na produção de uma espécie totalmente ativa de 37 kDa que se distribuiu entre as frações particulada e solúvel. A forma truncada da enzima foi facilmente solubilizada por detergentes e eluída dentro de sua faixa de massa molecular prevista. Esses resultados sugerem que o segmento carboxilo-terminal é importante na determinação da localização e regulação da PTPase. O nível de fosforilação de tirosina da proteína observado após 5 min de estimulação com fator de crescimento derivado de plaquetas foi reduzido nas células que superexpressavam qualquer forma da fosfatase, indicando que ambas são ativas in vivo. A superexpressão da enzima truncada resultou em uma taxa de crescimento que foi aproximadamente 50% da observada em células transfectadas com a cDNA da PTPase de comprimento total ou apenas com o vetor.