Liberação de ATP mediada por actina a partir de um complexo de ATP com miosina

A constante de taxa aparente de segunda ordem, ka-2, da ligação da actina a um estado miosina-ATP (M*.ATP) e a liberação de ATP para o meio foi determinada por dois métodos. O primeiro foi a medição da quantidade de ATP liberada quando a actina foi adicionada ao estado intermediário, M*.ATP; o segundo foi a medição da troca de oxigênio entre ATP e HOH. Um tratamento quantitativo da troca de ATP em equilíbrio com HOH é dado para permitir a extração de constantes de taxa elementares a partir dos dados. O acordo entre os dois métodos foi bom e, em baixa força iônica e 23 graus C, ka-2 é 6 X 10(5) M-1 s-1, que é aproximadamente um terço do valor da constante de taxa aparente de segunda ordem, ka4, da ligação da actina ao estado do produto de miosina (M**.ADP.Pi). A determinação de ka-2 permite que um limite inferior de 6 s-1 seja estabelecido para a taxa de primeira ordem de liberação de ATP de AM.ATP. Isso deve ser comparado com um valor de menos ou igual a 1.5 X 10(-4) s-1 para os passos equivalentes do esquema de miosina; assim, a actina aumenta a taxa por um fator de 4 X 10(4) ou mais. Uma proporção maior do ATP ligado é liberada para o meio como ATP com o aumento da concentração de actina. Isso reflete a contribuição para a limitação da taxa na concentração de actina saturante dos passos entre estados de miosina dissociados da actina.