Estabilidade do RNA Endógeno e Adicionado em Amostras de Sangue, Soro e Plasma

FUNDAMENTAÇÃO: O RNA circulante no plasma/soro é um campo emergente para diagnóstico molecular não invasivo. Como o RNA é amplamente considerado labile na circulação, investigamos a estabilidade e vários fatores pré-analíticos que podem afetar as concentrações de RNA em amostras de sangue. MÉTODOS: Amostras de sangue foram coletadas de 65 voluntários saudáveis. Os efeitos de duas variáveis pré-analíticas foram estudados: (a) atraso no processamento de sangue EDTA e sangue coagulado após veneseção, e (b) congelamento e descongelamento de plasma e soro. A labilidade do RNA livre adicionado em plasma também foi investigada. O RNA de plasma/soro foi medido por um ensaio de PCR em tempo real quantitativo para mRNA da glicerol-3-fosfato desidrogenase, enquanto o DNA foi medido por um ensaio de PCR em tempo real quantitativo para o gene beta-globina. RESULTADOS: Nenhuma diferença significativa foi encontrada para as concentrações de RNA plasmático obtidas de sangue EDTA não centrifugado que havia sido deixado a 4 graus C por 0, 6 e 24 h (P =0,182). Por outro lado, as concentrações de RNA no soro aumentaram significativamente ao longo de 24 h quando sangue coagulado não centrifugado foi armazenado a 4 graus C (P <0,01). Mais de 99% do RNA livre adicionado não pôde mais ser amplificado após incubação em plasma por 15 s. Plasma nunca congelado, plasma congelado-descongelado e plasma descongelado deixado à temperatura ambiente por 1 h não mostraram diferenças significativas na concentração de RNA (P =0,465). Nenhuma diferença significativa foi observada para o soro congelado-descongelado (P = 0,430). CONCLUSÕES: O RNA plasmático é estável em sangue EDTA não centrifugado armazenado a 4 graus C, mas para obter uma concentração de RNA sérico estável, o sangue coagulado não centrifugado deve ser armazenado a 4 graus C e processado dentro de 6 h. Um único ciclo de congelamento/descongelamento não produz efeito significativo na concentração de RNA do plasma ou soro.