hnRNP H é um componente de um complexo de reforço de splicing que ativa um exão alternativo c-src em células neuronais

A regulação do exão N1 do c-src é mediada por um reforço intrônico de splicing a jusante do local de splicing 5' N1. Experimentos anteriores mostraram que um conjunto de proteínas se junta ao núcleo mais conservado dessa sequência de reforço especificamente em extratos celulares neuronais WERI-1. Os componentes mais proeminentes deste complexo de reforço são as proteínas hnRNP F, KSRP e uma proteína não identificada de 58 kDa (p58). Esta proteína p58 foi purificada do extrato nuclear da célula WERI-1 por precipitação com sulfato de amônio, cromatografia Mono Q e imunoprecipitação com o anticorpo anti-Sm Y12. A análise da sequência peptídica da proteína p58 purificada identificou-a como hnRNP H. A imunoprecipitação de hnRNP H ligada ao RNA do reforço N1, assim como a análise de deslocamento em gel do complexo de reforço na presença de anticorpos específicos de hnRNP H, confirmou que hnRNP H é um componente proteico do complexo de reforço de splicing. A imunoprecipitação de intermediários de splicing de reações de splicing in vitro com anticorpo anti-hnRNP H indicou que hnRNP H permanece ligado ao pré-mRNA src após a montagem do spliceossomo. A imunodepleção parcial de hnRNP H do extrato nuclear inativou parcialmente o splicing do exão N1 in vitro. Essa inibição do splicing pode ser restaurada pela adição de hnRNP H recombinante, indicando que hnRNP H é um fator importante para o splicing de N1. Finalmente, ensaios de ligação in vitro demonstram que hnRNP H pode interagir com a proteína relacionada hnRNP F, sugerindo que hnRNPs H e F podem existir como um heterodímero em um único complexo de reforço. Essas duas proteínas presumivelmente cooperam entre si e com outras proteínas do complexo de reforço para direcionar o splicing para o exão N1 a montante.