Uma abordagem para a análise de recaída e reconstituição da medula após transplante autólogo de medula óssea utilizando transferência de gene mediada por retrovírus

O transplante autólogo de medula óssea (TAMO) é amplamente utilizado como tratamento para doenças malignas. Embora a principal causa de falha no tratamento seja a recaída, não se sabe se isso ocorre inteiramente devido à doença residual no paciente ou se células contaminantes na medula de resgate contribuem. Tentativas de purgar a medula de suas supostas células malignas residuais podem retardar a reconstituição hematopoética e são de eficácia incerta. Agora descrevemos como a transferência de gene mediada por retrovírus pode ser usada para elucidar a fonte de recaída após TAMO para leucemia mieloide aguda e avaliar a eficácia da purgação. Células-blasto leucêmicas mieloides clonogênicas na medula do paciente podem ser transduzidas com o retrovírus livre de auxiliar, LNL6, contendo o gene NeoR, com uma eficácia de 0% a 23,5% (média, 10,5%). Colônias transduzidas crescem em meios seletivos e a presença do gene marcador pode ser confirmada em colônias malignas individuais por meio da reação em cadeia da polimerase. Se essas células malignas permanecerem na medula “remissão” coletada, elas serão marcadas após exposição ao LNL6. A detecção do gene marcador nas células malignas presentes em qualquer recaída posterior seria uma evidência firme de que a doença residual contribuiu para a recorrência da doença, e permitiria a avaliação rápida de técnicas de purgação. A técnica também marca progenitores normais da medula de pacientes com leucemia mieloblástica aguda. Essas células formadoras de colônia podem ser detectadas em culturas de medula a longo prazo com uma frequência de 1% a 18% por até 10 semanas após a exposição ao vetor. Modelos animais e análise de tabelas de probabilidade sugerem que esses níveis de marcação in vitro são suficientes para fornecer informações sobre os mecanismos de recaída e a biologia da regeneração da medula in vivo. Esses dados pré-clínicos formam parte da base para os atuais estudos clínicos de transferência de genes na medula antes do TAMO.