Caracterização de um ligante específico para P-selectina em células mieloides. Uma glicoproteína menor com oligossacarídeos O-glicosilados sialilados

O reconhecimento de lectina-carboidrato entre as selectinas e seus ligantes está entre os primeiros eventos na recirculação de leucócitos, recrutamento de leucócitos em áreas inflamadas e egressão anormal de leucócitos em doenças. Anteriormente, descrevemos uma sialoglicoproteína dimérica de células mieloides com subunidades de massa molecular = 120 kDa, que é reconhecida seletivamente pela P-selectina (Moore, K.L., Stults, N.L., Diaz, S., Smith, D.F., Cummings, R.D., Varki, A., e McEver, R.P. (1992) J. Cell Biol. 188, 445-456). Aqui, demonstramos que este ligante da P-selectina transporta ácidos siálicos ligados alpha 2-3 e o motivo tetrasacarídico sialil-Lewisx (SLex). Esta glicoproteína contém < 1% do total de ácidos siálicos ligados à membrana e uma fração muito pequena do total de SLex nas membranas de neutrófilos. Embora haja uma resistência relativa à digestão por sialidase, a forma predominante de ácido siálico no ligante é ácido N-acetilneuramínico. A oxidação periodato seletiva da cadeia lateral dos ácidos siálicos não afeta a ligação da P-selectina e permite a introdução de etiqueta de trítio nos ácidos siálicos truncados. A beta-eliminação com borohidreto alcalino libera oligossacarídeos O-glicosilados rotulados tanto do ligante rotulado de neutrófilos quanto do ligante purificado de células HL-60 metabolicamente rotuladas com 3H-glicosamina. O ligante de neutrófilos e de células HL-60 também é suscetível à clivagem pela enzima O-sialoglicoprotease de Pasteurella hemolytica. A análise da especificidade dessa enzima sugere que o ligante da P-selectina transporta grandes quantidades de oligossacarídeos O-glicosilados sialilados próximos uns dos outros. A O-sialoglicoprotease aboliu tanto a ligação direta da P-selectina às células HL-60 quanto a adesão das células HL-60 à P-selectina imobilizada, sem diminuir significativamente a expressão total de SLex na superfície celular. Isso indica que o ligante de 120 kDa pode ser o principal determinante da interação P-selectina:célula mieloide in vivo. Finalmente, com base nos dados atuais e anteriores, hipotetizamos que o(s) sítio(s) de reconhecimento de alta afinidade deste ligante da P-selectina pode(m) ser derivado(s) de um "patch sacárido agrupado" de sequências de oligossacarídeos O-glicosilados sialilados fucosilados.