Identificação de um sítio de fosforilação CK2 no mdm2

Mdm2 é uma oncoproteína celular cuja função mais óbvia é a down-regulation da proteína supressora de crescimento p53. Representa uma proteína altamente fosforilada, mas pouco se sabe sobre os locais fosforilados in vivo, as quinases responsáveis pela fosforilação ou a relevância funcional do estado de fosforilação. Recentemente, demonstramos que o mdm2 é um bom substrato para a quinase de proteína CK2, pelo menos in vitro. A análise computacional da sequência primária de aminoácidos do mdm2 revelou 19 locais putativos de fosforilação CK2. Usando mutantes de deleção do mdm2 e uma biblioteca de peptídeos, identificamos o resíduo de serina na posição 269, que se encontra dentro de uma sequência consenso canônica de CK2 (EGQELSDEDDE), como o sítio de fosforilação CK2 mais importante. Além disso, usando o mutante mdm2 S269A para ensaios de fosforilação in vitro, demonstrou-se que este sítio foi fosforilado pela CK2. Estudos de ligação revelaram que a fosforilação do mdm2 em S269 não tem influência na ligação do p53 ao mdm2.