O fator de crescimento fibroblástico ácido diminui a expressão de actina α-músculo liso e induz apoptose em fibroblastos pulmonares normais humanos

A expansão de fibroblastos/myofibroblastos é crítica na patogênese da fibrose pulmonar. Até o momento, a maior parte da pesquisa focou em mediadores profibróticos, enquanto os estudos sobre fatores antifibróticos são escassos. Neste estudo, exploramos os efeitos do fator de crescimento fibroblástico ácido (FGF-1) e FGF-1 mais heparina (FGF-1+H) na taxa de crescimento dos fibroblastos, apoptose e diferenciação dos myofibroblastos. A heparina foi utilizada porque participa na sinalização do FGF-1. A taxa de crescimento foi avaliada pelo ensaio colorimétrico WST-1, a síntese de DNA pela incorporação de (3)Htimidina e a apoptose pela marcação do fim de fragmentos de dUTP mediada por transferase de desoxirribonucleotídeo terminal (TUNEL) e caspase 3 clivada. A expressão de actina alfa-músculo liso (alpha-SMA) foi examinada por imunocitoquímica, citometria de fluxo, PCR em tempo real e imunoblotting. Apesar da indução da síntese de DNA, FGF-1+H reduziu significativamente a taxa de crescimento dos fibroblastos. Isso correlacionou-se com um aumento significativo na apoptose, avaliada pelo TUNEL (41,6 +/- 1,4% vs. 12,5 +/- 0,6% dos controles; P < 0,01) e pela caspase 3 clivada (295 +/- 32 vs. 200 +/- 19 ng/10(6) células dos controles; P < 0,05). A imunocoloração dupla (alpha-SMA-TUNEL) revelou que os níveis de apoptose induzida foram semelhantes em fibroblastos e myofibroblastos. FGF-1+H inibiu o efeito do TGF-beta1 na diferenciação de myofibroblastos. As células positivas para alpha-SMA foram reduzidas pela imunocitoquímica de 44,5 +/- 6,5% para 10,9 +/- 1,9% e pela citometria de fluxo de 30,6 +/- 2,5% para 7,7 +/- 0,6% (P < 0,01). Além disso, FGF-1+H inibiu significativamente a indução de alpha-SMA pelo TGF-beta1 quantificada por PCR em tempo real e Western blot. Essa diminuição foi associada a uma redução de 35% na contração do gel de colágeno induzido pelo TGF-beta1. O efeito do FGF-1+H foi mediado por uma diminuição significativa da fosforilação de Smad2 induzida por TGF-beta1. O FGF-1 isoladamente apresentou efeitos semelhantes, mas menores. Essas descobertas sugerem que o FGF-1 pode ter um papel antifibrótico, induzindo apoptose em fibroblastos e inibindo a diferenciação de myofibroblastos.