Mutação da Topoisomerase II do Tipo em Estrains Clínicos de Pseudomonas aeruginosa Resistentes a Fluoroquinolonas Isolados em 1998 e 1999: Papel da Enzima Alvo no Mecanismo de Resistência a Fluoroquinolonas

O principal mecanismo de resistência a fluoroquinolonas para Pseudomonas aeruginosa é a modificação das topoisomerases do tipo II (gyrase do DNA e topoisomerase IV). Examinamos as mutações nas regiões determinantes de resistência a quinolonas (QRDR) dos genes gyrA, gyrB, parC e parE de isolados clínicos recentes. Foram 150 isolados com susceptibilidade reduzida a levofloxacino e 127 com susceptibilidade reduzida a ciprofloxacino entre 513 isolados coletados durante 1998 e 1999 no Japão. Os resultados da sequenciação previram a substituição de um aminoácido na QRDR da gyrase do DNA (GyrA ou GyrB) para 124 dos 150 estrains (82,7%); entre estes, 89 isolados possuíam mutações em parC ou parE que levaram a alterações de aminoácidos. As substituições de Ile por Thr-83 em GyrA e Leu por Ser-87 em ParC foram as principais mudanças, sendo detectadas em 48 estrains. Essas substituições estavam claramente associadas à redução da susceptibilidade a levofloxacino, ciprofloxacino e sparfloxacino; no entanto, o sitafloxacino apresentou alta atividade contra isolados com essas substituições. Purificamos GyrA (The-83 para Ile) e ParC (Ser-87 para Leu) por mutagênese direcionada e comparamos as atividades inibitórias das fluoroquinolonas. O sitafloxacino mostrou as atividades inibitórias mais potentes contra ambas as topoisomerases alteradas entre as fluoroquinolonas testadas. Esses resultados indicaram que, comparado a outras quinolonas disponíveis, o sitafloxacino manteve maior atividade contra isolados clínicos recentes com múltiplas mutações em gyrA e parC, o que pode ser explicado pelas altas atividades inibitórias do sitafloxacino contra ambas as enzimas mutadas.