Sinalização Dual do Receptor Fas: Iniciação de Ambas as Vias de Morte Celular Apoptótica e Necrotica

Células de fibrosarcoma murino L929 foram transfectadas com o receptor humano Fas (APO-1/CD95), e o papel de várias caspases na morte celular mediada por Fas foi avaliado. A ativação proteolítica da procaspase-3 e -7 foi demonstrada por análise de Western. Acetil-Tyr-Val-Ala-Asp-clorometilcetona e benzioloxicarbonil-Asp(OMe)-Glu(OMe)-Val-Asp(OMe)-fluorometilcetona++, inibidores tetrapéptidos de proteases do tipo caspase-1 e caspase-3, respectivamente, não conseguiram bloquear a apoptose induzida por Fas. Inesperadamente, os inibidores de caspase de amplo espectro benzioloxicarbonil-Val-Ala-Asp(OMe)-fluorometilcetona e benzioloxicarbonil-Asp(OMe)-fluorometilcetona tornaram as células ainda mais sensíveis à morte celular mediada por Fas, conforme medido após 18 horas de incubação. No entanto, quando o processo foi acompanhado microscopicamente, ficou claro que a apoptose induzida por anti-Fas em células L929 transfectadas com Fas foi bloqueada durante as primeiras 3 horas, e subsequentemente as células morreram por necrose. Assim como na necrose induzida por fator de necrose tumoral (TNF), o tratamento com Fas levou ao acúmulo de radicais livres de oxigênio, e a necrose mediada por Fas foi inibida pelo eliminador de radicais de oxigênio butilado hidroxi-anisol. No entanto, ao contrário do TNF, o anti-Fas não ativou o fator nuclear kappaB sob essas condições necróticas. Esses resultados demonstram a existência de duas vias diferentes originadas do receptor Fas, uma levando rapidamente à apoptose e, se essa via apoptótica for bloqueada por inibidores de caspase, uma segunda direcionando as células para a necrose e envolvendo a produção de radicais de oxigênio.