Trans-complementação da proteína NS1 do vírus da febre amarela revela um papel na replicação precoce do RNA

A análise mutacional da proteína não estrutural 1 (NS1) do vírus da febre amarela (YF) a implicou na replicação do RNA viral. Para explorar mais essa observação, buscamos um método para desacoplar a função da NS1 da expressão e processamento da NS1 como parte da grande poliproteína do YF. Aqui descrevemos uma estratégia para fornecer NS1 em trans, utilizando um vetor do vírus Sindbis não citopático. A replicação de um genoma defeituoso do YF contendo uma grande deleção em quadro da NS1 dependia da expressão funcional da NS1. O vírus mutante recuperado mostrou conter a deleção e foi neutralizado por antissoro específico ao YF. O vírus mutante complementado aumentou em título com cinética semelhante à do YF parental 17D, mas atingiu picos em títulos mais baixos. A trans-complementação nos permitiu derivar estoques de YF defeituoso em NS1 com titer alto e livres de ajudantes, com os quais caracterizamos mais o papel desse produto gênico na replicação do RNA. Os primeiros ciclos de replicação do RNA foram analisados utilizando um ensaio de proteção por RNase específico de fita sensível. Documentamos esses eventos para vírus mutantes e do tipo selvagem na presença ou ausência de complementação. Esses dados sugerem fortemente um papel para a NS1 antes ou na síntese inicial da fita negativa.