Análise da estrutura primária e ligação da lamin B e DNA da LBR humana, uma proteína integral da membrana interna do envelope nuclear

Determinamos a estrutura primária da LBR humana, uma proteína integral da membrana interna do envelope nuclear, e examinamos suas interações com a lamin B e DNA. A LBR humana é 68% idêntica ao receptor de lamin B de galinha e possui um domínio amino-terminal nucleoplasmático básico de 208 aminoácidos, seguido por um domínio hidrofóbico com oito segmentos transmembrana putativos. O domínio amino-terminal contém uma sequência rica em Ser-Arg e sites de consenso para fosforilação pela proteína quinase A e pela proteína quinase p34cdc2. Uma proteína de fusão contendo o domínio amino-terminal da LBR humana é reconhecida por autoanticorpos de pacientes com cirrose biliar primária, e esses anticorpos no soro rotulam o envelope nuclear quando examinados por microscopia de imunofluorescência. O domínio amino-terminal da LBR precipita a lamin B de extratos nucleares e retarda a migração de DNA de dupla fita submetido à eletroforese em gel de agarose. Quando imobilizado em nitrocelulose, o domínio amino-terminal da LBR também se associa ao DNA, e a sequência entre os aminoácidos 71 e 100, que contém a sequência rica em Ser-Arg, é necessária para a ligação ao DNA. Esses resultados demonstram que a LBR é conservada entre as espécies vertebradas e que seu domínio nucleoplasmático pode potencialmente mediar a interação tanto da lâmina nuclear quanto da cromatina com a membrana nuclear interna.