A Nucleoproteína do Vírus da Influenza Interage com as Proteínas Polimerase do Vírus da Influenza

A nucleoproteína do vírus da influenza (NP) é um fator crítico no ciclo infeccioso viral ao alternar a síntese de RNA do vírus da influenza do modo de transcrição para o modo de replicação. Neste estudo, investigamos a interação da NP com o complexo de proteína polimerase viral. Usando coimunoprecipitação com anticorpos monospecíficos ou monoclonais, observamos que a NP interagiu com o complexo de proteína polimerase livre de RNP em células infectadas pelo vírus da influenza. Além disso, a coexpressão dos componentes do complexo de proteína polimerase (PB1, PB2 ou PA) com a NP, seja juntos ou em pares, revelou que a NP interage com PB1 e PB2, mas não com PA. A interação da NP com PB1 e PB2 foi confirmada tanto por coimunoprecipitação quanto pela marcação com histidina dos complexos NP-PB1 e NP-PB2. Além disso, foi observado que a interação NP-PB2 era bastante lábil e sensível à dissociação em 0,1% de dodecil sulfato de sódio e que a estabilidade da interação NP-PB2 era regulada pelas sequências presentes no terminal COOH da NP. A análise de mutantes de deleção da NP revelou que pelo menos três regiões da NP interagiam independentemente com PB2. Uma análise detalhada do terminal COOH da NP por mutação de resíduos de serina para alanina (SA), seja individualmente ou juntos, demonstrou que mutações SA nesta região não afetaram a ligação da NP ao PB2. No entanto, algumas mutações SA no terminal COOH afetaram drasticamente a atividade funcional da NP em um ensaio de transcrição-replicação in vivo, enquanto outras apresentaram um fenótipo sensível à temperatura e ainda outras não tiveram efeito na transcrição e replicação do RNA viral. Esses resultados sugerem que uma interação direta da NP com as proteínas polimerase pode estar envolvida na regulação da troca da síntese de RNA viral de transcrição para replicação.