Identificação das formas de proteínas ligadoras do fator de crescimento semelhante à insulina produzidas por fibroblastos humanos e os mecanismos que regulam sua secreção.

Os fibroblastos humanos secretam proteínas ligadoras do fator de crescimento semelhante à insulina (IGFBPs) que podem modificar a ação do fator de crescimento semelhante à insulina (IGF) I. Determinamos as identidades moleculares de três formas de IGFBPs que são secretadas por fibroblastos humanos in vitro. A análise por ligante em meios condicionados de fibroblastos revelou que as formas M(r) 43.000 e 39.000 eram as mais abundantes, mas que as formas M(r) 31.000 e 24.000 também estavam presentes. Um ant soro específico para IGFBP-5 reagiu com a forma M(r) 31.000, e um ant soro específico para IGFBP-4 reconheceu apenas a forma M(r) 24.000. As formas M(r) 39.000 e 43.000 foram detectadas pelo ant soro de IGFBP-3. Mais provas de que os fibroblastos sintetizavam essas formas de IGFBPs foram obtidas pelo Northern blotting. Uma sonda de cDNA para IGFBP-3 hibridizou com um transcrito de 2,4 quilobases (kb), enquanto uma sonda de cDNA para IGFBP-5 reconheceu um único transcrito de 6,0 kb, e uma sonda de cDNA para IGFBP-4 reconheceu transcritos de 2,2 e 2,0 kb. IGF-I e -II causaram um aumento mínimo (menos de 43%) na abundância de mRNA de IGFBP-5 e não tiveram efeito na abundância de mRNA de IGFBP-4. IGF-I e -II (100 ng/ml) estimularam aumentos de 6 a 8 vezes nos níveis de IGFBP-5, enquanto o IGFBP-4 foi inibido. A insulina não provocou nenhuma alteração em IGFBP-5, sugerindo que a ligação dos IGFs aos IGFBPs era necessária para detectar o aumento. A imunoblotagem para IGFBP-5 revelou um fragmento de M(r) 23.000 (não ligador ao IGF-I). Para determinar se os IGFs estavam influenciando a degradação proteolítica de IGFBP-5, IGFBP-5 puro foi adicionado a culturas de fibroblastos e incubado por 4 horas a 37 graus C. A quantidade de formação de fragmentos foi atenuada pela presença de IGF-I e -II, mas não pela insulina, sugerindo que este é um mecanismo pelo qual os IGFs atuam para modular a concentração de IGFBP-5. Em contraste com os IGFs, a forskolina, que aumentou a abundância e secreção de mRNA de IGFBP-4 e -5, não teve efeito na formação de fragmentos. Os resultados mostram que fibroblastos humanos sintetizam e secretam IGFBP-3, -4 e -5 e que mudanças no cAMP intracelular regulam a síntese, enquanto os IGFs regulam os níveis de IGFBP-4 e -5 por mecanismos pós-transcricionais.