Purificação, Caracterização e Diferenciação in vitro de Cito-trofoblastos da Placenta Humana ao Termo*

Cito-trofoblastos funcionais altamente purificados foram preparados a partir de placentas humanas a termo, adicionando um passo de centrifugação em gradiente de Percoll a um método padrão de dispersão com tripsina-DNase. Os trofoblastos mononucleares isolados apresentaram uma média de 10 micrômetros de diâmetro, com células ocasionalmente medindo até 20-30 micrômetros. A viabilidade foi superior a 90%. A microscopia eletrônica de transmissão revelou que as células apresentavam características estruturais finas típicas de trofoblastos. Em contraste com os trofoblastos sinciciais de placentas a termo intactas, essas células não exibiram coloração para hCG, lactogênio placentário humano, beta 1-glicoproteína específica da gravidez ou citokeratinas de baixo peso molecular por métodos de imuno-peroxidase. Células endoteliais, fibroblastos ou macrófagos não contaminaram os cito-trofoblastos purificados, como evidenciado pela falta de coloração por imuno-peroxidase com anticorpos contra vimentina ou alpha 1-antiquimotripsina. As células produziram progesterona (1 ng/10(6) células . 4 h), e a síntese de progesterona foi estimulada em até 8 vezes na presença de 25-hidroxicolesterol (20 microgramas/ml). Elas também produziram estrogênios (1360 pg/10(6) células . 4 h) quando fornecidas com androstenediona (1 ng/ml) como precursor. Quando colocadas em cultura, os cito-trofoblastos consistentemente formaram agregados, que subsequentemente se transformaram em sincícios dentro de 24-48 h após a semeadura. A cinematografia em lapso de tempo revelou que esse processo ocorreu por fusão celular. Os grupos sincitiais presumidos foram comprovados como verdadeiros sincícios por microinjeção de alpha-actinina marcada fluorescentemente, que difundi completamente ao longo do citoplasma sincicial dentro de 30 min. A coloração por imuno-peroxidase de trofoblastos cultivados entre 3,5 e 72 h após a semeadura revelou um aumento progressivo na glicoproteína beta 1-específica da gravidez citoplasmática, hCG e lactogênio placentário humano, concomitante com o aumento no número de agregados e sincícios. Em todos os momentos examinados, células isoladas ocasionalmente positivas para esses marcadores foram identificadas. A RIA do meio de cultura gasto para hCG revelou um aumento significativo na hCG secretada, paralelamente ao aumento nas células e sincícios positivos para hCG identificados por métodos de imuno-peroxidase. Concluímos que os cito-trofoblastos humanos se diferenciam em cultura e se fundem para formar sinciciotrofoblastos funcionais.