Inibição e Papel do let-7d na Fibrose Pulmonar Idiopática

JUSTIFICATIVA: A fibrose pulmonar idiopática (FPI) é uma doença pulmonar fibrosa crônica, progressiva e geralmente letal, caracterizada por mudanças profundas no fenótipo das células epiteliais e proliferação de fibroblastos. OBJETIVOS: Determinar mudanças na expressão e papel de microARNs na FPI. MÉTODOS: O RNA de 10 tecidos de controle e 10 de FPI foi hibridizado em microarrays de microARNs da Agilent, e os resultados foram confirmados por reação em cadeia da polimerase quantitativa em tempo real e hibridização in situ. A ligação do SMAD3 ao promotor do let-7d foi confirmada por imunoprecipitação de cromatina, ensaio de deslocamento eletroforético, ensaios de luciferase e expressão reduzida de let-7d em resposta ao fator de crescimento transformante-beta. HMGA2, um alvo do let-7d, foi localizado por imunohistoquímica. Em camundongos, o let-7d foi inibido pela administração intratraqueal de um antagomir de let-7d e seus efeitos foram determinados por imunohistoquímica, imunofluorescência, reação em cadeia da polimerase quantitativa em tempo real e morfometria. MEDIÇÕES E RESULTADOS PRINCIPAIS: Dezoito microARNs, incluindo let-7d, estavam significativamente reduzidos na FPI. O fator de crescimento transformante-beta regulou negativamente a expressão do let-7d, e a ligação do SMAD3 ao promotor do let-7d foi demonstrada. A inibição do let-7d causou aumentos nos marcadores mesenquimatosos N-caderina-2, vimentina e actina muscular lisa alfa (ACTA2), bem como HMGA2 em várias linhagens celulares epiteliais. O let-7d estava significativamente reduzido nos pulmões de FPI e o número de células epiteliais expressando let-7d correlacionou-se com as funções pulmonares. HMGA2 foi aumentado nas células epiteliais alveolares dos pulmões de FPI. A inibição do let-7d in vivo causou espessamento septal alveolar e aumentos na expressão de colágeno, ACTA2 e S100A4 em células epiteliais alveolares exprimindo SFTPC (proteína surfactante C associada aos pulmões). CONCLUSÕES: Nossos resultados indicam um papel para microARNs na FPI. A regulação negativa do let-7d na FPI e os efeitos profibróticos dessa regulação negativa in vitro e in vivo sugerem um papel regulador chave para esse microARN na prevenção da fibrose pulmonar. Ensaio clínico registrado em www.clinicaltrials.gov (NCT 00258544).