Formação do Peptídeo Beta Amiloide em Preparações Isentas de Células

O peptídeo beta amiloide (Abeta) é um peptídeo curto que é o principal constitutivo das placas amiloides e depósitos amiloides cerebrovasculares encontrados na doença de Alzheimer. A falta de um sistema isento de células para estudar a formação de Abeta limitou nossa compreensão dos mecanismos moleculares envolvidos em sua produção. Reportamos aqui a reconstituição de tal sistema isento de células. A formação de Abeta reconstituída foi dependente de temperatura e exigiu ATP. A pré-incubação com a quinase de proteína C purificada (PKC) induziu uma inibição pronunciada da formação de Abeta, semelhante àquela observada em células intactas após a estimulação da PKC. Os antagonistas da calmodulina W-7 e trifluoperazina inibiram a formação de Abeta e aprimoraram a ação da PKC tanto no sistema isento de células quanto em células intactas. Um papel para a fosfatase de proteínas ativada por cálcio/calmodulina, calcineurina, na regulação da formação de Abeta foi demonstrado usando um inibidor peptídico específico da calcineurina in vitro, assim como a ciclosporina A, um inibidor permeável a células da calcineurina, em células intactas. Nossos resultados sugerem que um único substrato pode mediar ações opostas da PKC e da calcineurina na regulação da formação de Abeta.