Detecção Rápida e Simultânea de Cinco Bactérias Patogênicas Alimentares Viáveis por PCR Multiplex Acoplada a PMAxx Induzida por Luz em Suco Fresco

Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Shigella, Pseudomonas aeruginosa e Klebsiella pneumoniae são patógenos alimentares comuns. Neste estudo, a PCR multiplex acoplada a PMAxx induzida por luz (PMAxx-mPCR) foi estabelecida para detectar os cinco patógenos alimentares mencionados em suco fresco ao mesmo tempo. Além disso, o pré-tratamento com PMAxx poderia distinguir efetivamente bactérias vivas de bactérias mortas. As condições otimizadas de pré-tratamento com PMAxx foram incubação com uma concentração final de 10 μmol/L de PMAxx por 10 minutos e, em seguida, fotólise por 8 minutos. Após o pré-tratamento com PMAxx, a diferença nos valores de Ct com ou sem PMAxx foi determinada por PCR em tempo real quantitativa. Os resultados mostraram uma diferença significativa no valor de Ct antes e depois do tratamento com PMAxx. Finalmente, as amostras de suco fresco contaminadas por bactérias tratadas com corante PMAxx foram detectadas por mPCR. O limite de detecção da PMAxx-mPCR foi de 102 unidades formadoras de colônia (UFC)/mL para E. coli, Shigella, P. aeruginosa e K. pneumoniae e 103 UFC/mL para S. aureus. Comparado com a detecção por mPCR de amostras sem tratamento com PMAxx, o método proposto resolveu o problema de falso positivo devido a bactérias mortas. Assim, um método preciso e eficiente para a detecção simultânea de cinco tipos de bactérias patogênicas foi estabelecido. Este método poderia ser aplicado a procedimentos analíticos para garantir a segurança alimentar.