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基于Q-PCR的循环游离DNA（ccfDNA）的高性能分析检测方法的发展需要良好的结构和大小知识。在本研究中，我们通过原子力显微镜（AFM）首次可视化地确定了来自结直肠癌（CRC）患者和健康供体的血浆样本中的ccfDNA。除了通过Q-PCR进行的片段大小分布分析外，此分析确认ccfDNA高度碎片化，并且在CRC血浆中超过80%的ccfDNA片段小于145 bp。我们调整了一种等位基因特异性阻断剂（ASB）Q-PCR以适应小ccfDNA片段，同时测定ccfDNA的总浓度、点突变的存在、突变等位基因的比例以及ccfDNA完整性指数。这些数据在124个CRC临床样本和71个健康个体中从分析上验证了这四个参数。多标志物方法Intplex使肿瘤ccfDNA的敏感和特异的非侵入性分析成为可能，在成本、质量控制和在每个临床中心实验室的易于实施方面具有巨大的潜力.
Moulière等（Mon，）研究了这个问题.