Abstract PO3-24-02: Molekulare Charakterisierung und therapeutischer Ansatz für VISTA+ triple-negative Brustkrebserkrankungen

Abstract Einführung: Derzeit zugelassene Immuntherapeutika der FDA für triple-negativen Brustkrebs sind nur für eine Teilgruppe von Patienten verfügbar, was die Notwendigkeit unterstreicht, verbesserte immunzielgerichtete Strategien zu entwickeln. VISTA (V-domain Ig Suppressor der T-Zell-Aktivierung) ist ein Einzel-Transmembran-Immun-Checkpoint-Rezeptor, der ein aufkommendes klinisches Ziel für die Tumorimmuntherapie darstellt. Er wird bei gesunden Individuen weitgehend auf lymphoiden und myeloiden Zellen exprimiert, ist häufig auf Zellen der Tumorumgebung exprimiert und kann auf Tumorzellen in einer Vielzahl von Tumoren abnormal hochreguliert sein. Obwohl VISTA naiven T-Zellen Ruhe verleiht, bleiben die molekularen Mechanismen, die für diesen Effekt verantwortlich sind, unklar. Auch die Auswirkungen der VISTA-Expression auf Tumorzellen sind schlecht definiert. Methoden: Eine multi-omische Profilierung wurde an menschlichen Brustkrebszelllinien durchgeführt, um die durch Wachstumsfaktoren stimulierten immunregulatorischen Gene zu bestimmen. Menschliche Tumormuster von triple-negativem Brustkrebs (N=248) wurden durch Immunhistochemie auf die Expression von VISTA, PDL1, PD1 und FoxP3 untersucht. Die VISTA-Expression wurde in menschliche und Maus-Triple-negative Brustkrebszelllinien eingeplant und Wachstumsmetriken wurden in vitro sowie in immuncompetenten (syngenen) und immunodefizienten (Xenograft) Maus-Tumormodellen charakterisiert. Der Membranrezeptor-Traffic und die Lokalisation von EGFR wurden in menschlichen TNBC-Zelllinien, die VISTA und VISTA-Mutanten exprimieren, durchgeführt. Die Nähe-Biotinylierung identifizierte Proteinpartner, die mit dem intrazellulären Bereich von VISTA interagierten. Deletionsmutagenese wurde durchgeführt, um Motive zu identifizieren, die für biochemische Wechselwirkungen zwischen VISTA und Clathrin-Adapterproteinen erforderlich sind. Die Lokalisation der Clathrin-Adapter wurde in WT- und VISTA-Knockout-Zelllinien untersucht. Die Zytokinantwort, die Lokalisation von Clathrin-Adaptern und die Tumorwachstumsdynamik wurden in TNBC-Zelllinien gemessen, die VISTA oder VISTA-Mutanten exprimieren. Ergebnisse: Eine Klasse von menschlichen triple-negativen Brustkrebserkrankungen mit hoher VISTA-Expression, niedriger Tumorinfiltration von Lymphozyten und niedrigem Proliferationsindex (8-20% aller TNBCs) wurde identifiziert. Tumormodelle zeigten, dass die erzwungene Expression von VISTA in Tumorzellen das Wachstum unterdrückte, selbst in Abwesenheit eines Immunsystems. Dieser Effekt wurde auf den zytoplasmatischen Bereich von VISTA zurückgeführt, der keine definierten Signaldomänen aufweist. Durch biochemische Ansätze wurden die Clathrin-Adapter-Moleküle NUMB und GULP1 in komplex mit einem intrazellulären NPGF-Motiv von VISTA gefunden. Dieses Motiv sequestrierte NUMB in frühen Endosomen, was zu verringertem NUMB-Recycling für die EGFR-Endozytose führte und somit das Wachstum unterdrückte. VISTA beeinträchtigte das NUMB-Recycling, indem es die Bildung des Rab11-Effektor-Komplexes blockierte. VISTA-NPGF-Mutationen störten die Zytokinsekretion in gemischten Lymphozytenassays nicht. VISTA-targetierte Antikörper störten die NUMB-Sequestrierung nicht. VISTA+ Tumoren waren selektiv empfindlich gegenüber VISTA-blockierenden Antikörpern. Schlussfolgerungen: VISTA+ TNBC weisen unterschiedliche Merkmale auf, einschließlich eines langsameren Proliferationsindex und einer erhöhten Empfindlichkeit gegenüber VISTA-blockierenden Antikörpern. Diese Arbeit identifiziert Mechanismen, durch die VISTA einen ruhenden zellulären Zustand erzwingt, indem Clathrin-Adapterproteine von Orten der Endozytose in Krebszellen sequestiert werden. Dies ist die erste Beschreibung der intrazellulären molekularen Mechanismen, die von VISTAs intrazellulärem Schwanz kontrolliert werden. Es könnte Informationen zu Merkmalen des VISTA-abhängigen Immun-Checkpoints liefern, die genutzt werden könnten, um die Tumorimmunität zu verbessern. Zitationsformat: Yan Zhao, Fatima Charles, Andrew Lipchik, Yan Peng, James Ford, Melinda Telli, Song Zhang, Allison Kurian, Michael Snyder, Joshua Gruber. Molekulare Charakterisierung und therapeutischer Ansatz für VISTA+ triple-negative Brustkrebserkrankungen Abstract. In: Proceedings of the 2023 San Antonio Breast Cancer Symposium; 2023 Dec 5-9; San Antonio, TX. Philadelphia (PA): AACR; Cancer Res 2024;84(9 Suppl):Abstract Nr PO3-24-02.