Abstract 3624: Ein kostengünstiges Kit zur sanften, effektiven und zeitgerechten Isolation von extrazellulären Vesikeln (GET EVs): Beschleunigung der Entwicklung von RNA-basierten Flüssigbiopsien für neuroendokrine Neoplasien

Abstract Extrazelluläre Vesikel (EVs) sind Zellfragmente, die von allen Zellen freigesetzt werden und somit vielversprechende Plattformen für die Entwicklung von Krebs-Biomarkern darstellen. Die effektive Isolation von ultrareinen EVs für nachgelagerte Analysen ist entscheidend für die Entwicklung von EV-basierten Flüssigbiopsien. Aktuelle Methoden zur Isolation von EVs, wie Ultrazentrifugation (UC) und andere kommerzielle EV-Isolationskits, sind enttäuschend aufgrund von Schäden an EVs, der benötigten Zeit und geringen EV-Rückgewinnungsraten. Als Antwort darauf haben wir ein "GET EV"-Kit entwickelt, das auf den Prinzipien der Lipid-Energiezustände basiert, auch bekannt als das wässrige Zwei-Phasen-System (ATPS), um EVs aus jedem Medium zu isolieren. Die Nanoskalen-Flowzytometrie (nFC)-Analyse ergab, dass ATPS eine höhere EV-Anreicherungskapazität (21,4 × vs. 10,9 ×-fache Anreicherung) und eine höhere EV-Rückgewinnungseffizienz (97,6 % vs. 69,3 % Rückgewinnung) als UC aufweist. Andere EV-Isolationskits wurden getestet und waren hinsichtlich der EV-Rückgewinnung und der EV-RNA-Rückgewinnung unterlegen im Vergleich zu ATPS. EV-Subpopulationen, bestimmt durch EV-Biomarker (CD9, CD63, CD81, usw.), wurden durch nFC bestätigt. "Omics"-Studien (kleine RNA-Sequenzierung und Proteomik) bestätigten ebenfalls das Vorhandensein der erwarteten EV-Marker. Wir haben eine RNA-basierte Flüssigbiopsie für neuroendokrine Neoplasien (NENs) entwickelt, indem wir die Anwesenheit von EVs quantifiziert haben, die miR-375 enthalten, einem etablierten Biomarker für NENs. Mit dem GET EVs-Kit isolierten wir EVs aus Plasma-Proben gesunder Freiwilliger sowie von Patienten mit NEN. RT-qPCR zeigte eine angereicherte Expression von miR-375 in EVs, die aus Plasma-Proben von Lungen- und GI-NEN-Patienten isoliert wurden. Unsere Studie belegt die Verwendung von GET EV-Kits zur effizienten, schnellen und sanften Isolation von EVs aus kleinen Plasma-Proben (250 µL). Dies ist eine kostengünstige Innovation, die endlich die Entwicklung anderer RNA-basierter Flüssigbiopsien für andere Krankheitsorte mit erheblichen diagnostischen und prognostischen Implikationen ermöglichen wird. Zitationsformat: Boyang Su, Morteza Jeyhani, Xiaojing Yang, Jina Nanayakkara, Reese Wunsche, Neil Renwich, Scott Tsai, Hon Leong. Ein kostengünstiges Kit zur sanften, effektiven und zeitgerechten Isolation von extrazellulären Vesikeln (GET EVs): Beschleunigung der Entwicklung von RNA-basierten Flüssigbiopsien für neuroendokrine Neoplasien abstract. In: Proceedings of the American Association for Cancer Research Annual Meeting 2024; Teil 1 (Reguläre Abstracts); 2024 Apr 5-10; San Diego, CA. Philadelphia (PA): AACR; Cancer Res 2024;84 (6Suppl): Abstract nr 3624.