Zusammenfassung 4417: Entwicklung biochemischer Screening-Assays zur Erleichterung der Wirkstoffforschung bei RNA m6A-Modifikationsregulatoren

Zusammenfassung In den letzten Jahren hat sich das Wissen über RNA-Modifikationen und deren Regulation erheblich erweitert und bietet neue Einblicke und Strategien zur Erforschung potenzieller Therapeutika für die Pathogenese verschiedener Krankheiten, einschließlich Krebs. Bisher wurden mehrere chemische Modifikationen in RNA identifiziert, darunter die N6-Methyladenosin (m6A)-Modifikation, der häufigste und am besten untersuchte epitranskriptomische Marker, der in mRNA und langen nicht-codierenden RNAs gefunden wird. Die abnormale m6A-Expression ist nachweislich mit Tumorigenese, Krebsstammzelligkeit und Resistenz gegen Krebsmedikamente assoziiert. Die Methylierung an 6-Adenosin der RNA ist ein dynamischer und reversibler Prozess, der eng durch seinen Schreiber, das m6A-Methyltransferase-Komplex, sowie durch die Entferner, FTO und ALKBH5, reguliert wird. Das m6A-Methyltransferase-Komplex enthält METTL3-METTL14-WTAP als Kernkomponenten. METTL3 ist die katalytische Komponente, die durch die Bildung eines Heterodimers mit METTL14 aktiviert wird. Hohe METTL3-Expression findet sich in mehreren Krebsarten wie Brust-, Lungen-, Leber-, Magen-, Dickdarmkrebs, AML, und ein METTL3-katalytischer Inhibitor hat sich als verzögernd bei der AML-Fortschreitung in Mausmodellen erwiesen. Proteine, die an RNA-m6A-Modifikationen binden, um deren Signalgebung auszuführen, werden als m6A-Leser bezeichnet. Leser werden in drei Hauptklassen unterteilt: YTH-Domänenproteine, IGF2-mRNA-bindende Proteine und heterogene nukleare Ribonucleoproteine. Es wurde festgestellt, dass YTH-Familienleser onkogene Rollen bei mehreren Krebsarten einschließlich AML, Brust-, Lungen-, CRC und Glioblastom spielen. Neueste Studien legen nahe, dass die Hemmung der m6A-Bindung einzelner YTH-Familienproteine eine vielversprechende therapeutische Strategie darstellt, jedoch müssen noch potente Inhibitoren identifiziert werden. Dieses Poster fasst die aktuellen Assays zusammen, die wir entwickelt haben, um die Entdeckung von Krebstherapeutika in m6A-bezogenen Protein-Zielen zu erleichtern. Wir präsentieren die Entwicklung und Validierung eines Assays zur Identifizierung von METTL3-katalytischen Inhibitoren mithilfe unserer proprietären Hotspot-Technologie. Außerdem zeigen wir die Entwicklung von HTRF-basierten biochemischen Assays für alle fünf YTH-Familienproteine YTHDF1-3 und YTHDC1-2, um Moleküle zu screenen, die die Protein-m6A-Interaktion stören. Weiterhin untersuchen wir die Selektivität eines von der FDA zugelassenen Medikaments, Tegaserod, einem berichteten YTHDF1-Inhibitor, anhand einer strukturbasierten virtuellen Screening zwischen YTH-Familienproteinen. Zitierformat: Safnas F. AbdulSalam, Sung Won Oh, Brenna P. Lee, Joseph J. Ferry, John R. Ries, Kurumi Y. Horiuchi. Entwicklung biochemischer Screening-Assays zur Erleichterung der Wirkstoffforschung bei RNA m6A-Modifikationsregulatoren zusammengefasst. In: Tagungsband der American Association for Cancer Research Jahrestagung 2024; Teil 1 (Reguläre Abstracts); 5.-10. April 2024; San Diego, CA. Philadelphia (PA): AACR; Cancer Res 2024;84 (6Suppl): Zusammenfassungsnr. 4417.