Substratanforderungen für die Funktion von let-7 im sich entwickelnden Zebrafischembryo

MikroRNAs (miRNAs) sind an der Regulation der Genexpression auf posttranskriptionaler Ebene beteiligt, indem sie sich an die 3'-UTR (nicht-translatierte Region) von mRNAs anlagern. Die let-7 miRNA wurde erstmals in Caenorhabditis elegans entdeckt und ist evolutionär konserviert. Wir verwendeten Zebrafischembryonen als vertebratives in vivo-System, um die Substratanforderungen für die Funktion von let-7 zu studieren. Die Injektion einer doppelsträngigen let-7 miRNA in die Zygoten von Zebrafischen und Fröschen verursacht spezifische phänotypische Defekte. Nur der Antisense-Strang des let-7-Duplex hat biologische Aktivität. Darüber hinaus wird mRNA von gfp, die an die 3'-UTR eines Zebrafisch-lin-41-Orthologs (ein vermutetes Ziel von let-7) fusioniert ist, durch let-7 zum Schweigen gebracht. Punktmutantenstudien ergaben, dass die beiden let-7-Zielstellen in der lin-41 3'-UTR sowohl essentiell als auch ausreichend für das Schweigen sind. let-7 und mir221 können gemeinsam, aber nicht jeweils allein, ein Konstrukt mit einer der let-7-Zielstellen, die durch eine Zielstelle für mir221 ersetzt wurde, zum Schweigen bringen, was zeigt, dass zwei verschiedene miRNAs den erforderlichen kooperativen Effekt liefern können. let-7-Zielstellen können verschoben werden: sie sind auch funktional, wenn sie in der kodierenden Sequenz oder sogar in der 5'-UTR von gfp positioniert sind. Wir nutzten Reporter- und phänotypische Assays, um die Aktivität aller möglichen Punktmutanten-Derivate von let-7 zu analysieren, und fanden heraus, dass nur der 5'-Bereich für die Funktion von let-7 kritisch ist.