Ein auf Östrogenrezeptoren basierender transaktivator XVE vermittelt hoch induzierbare Genexpression in transgenen Pflanzen

Wir haben ein auf Östrogenrezeptoren basierendes chemisch induzierbares System für den Einsatz in transgenen Pflanzen entwickelt. Ein chimärer Transkriptionsaktivator, XVE, wurde durch Fusion der DNA-bindenden Domäne des bakteriellen Repressors LexA (X), der sauren transaktivierenden Domäne von VP16 (V) und der regulatorischen Region des menschlichen Östrogenrezeptors (E; ER) zusammengestellt. Die transaktivierende Aktivität des chimären XVE-Faktors, dessen Expression durch den starken konstitutiven Promoter G10-90 kontrolliert wurde, wurde streng durch Östrogene reguliert. In transgenen Arabidopsis- und Tabakpflanzen kann das estradiol-aktivierte XVE die Expression eines GFP-Reportergens stimulieren, das durch den Zielpromoter kontrolliert wird, der aus acht Kopien des LexA-Operators besteht, die stromaufwärts des -46 35S minimalen Promoters fusioniert sind. Nach Induktion durch Estradiol können die GFP-Expressionsniveaus bis zu achtmal höher sein als die, die von einem 35S-Promoter transkribiert werden, während die nicht induzierten Kontrollen keine nachweisbaren GFP-Transkripte aufweisen, wie durch Northern-Blot-Analysen überwacht. Weder toxische noch adverse physiologische Wirkungen des XVE-Systems wurden in transgenen Arabidopsis-Pflanzen unter allen getesteten Bedingungen beobachtet. Das XVE-System scheint daher ein zuverlässiges und effizientes chemisch induzierbares System zur Regulierung der Transgenexpression in Pflanzen zu sein.