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Aerobe Methanotrophen oxidieren Methan bei Umgebungsbedingungen und Druck und sind daher attraktive Systeme für Methan-basierte Biokonversionen. In dieser Arbeit haben wir genetische Werkzeuge für Methylomicrobium buryatense, einen haloalkaliphilen gammaproteobakteriellen (Typ I) Methanotrophen, entwickelt und validiert. M. buryatense wurde direkt auf Erdgas isoliert und wächst robust in reiner Kultur mit einer Verdopplungszeit von 3 Stunden, was eine schnelle genetische Manipulation im Vergleich zu vielen anderen methanotrophen Arten ermöglicht. Zum Nachweis des Konzepts verwendeten wir ein Sucrose-Gegenselektionssystem, um die Glykogenproduktion in M. buryatense zu eliminieren, indem wir unmarkierte Deletionen in zwei redundanten Glykogen-Synthase-Genen konstruierten. Wir wählten auch eine genetisch besser handhabbare Stammvariante aus, die mit kleinen Inkompatibilitätsgruppe P (IncP)-basierten Breitspektrum-Vektoren konjugiert werden kann, und stellten fest, dass diese Fähigkeit auf den Verlust des nativen Plasmids zurückzuführen ist. Diese Werkzeuge machen M. buryatense zu einem vielversprechenden Modellsystem für das Studium der Physiologie aerober Methanotrophen und ermöglichen die Stoffwechselengineering in diesem Bakterium für die industrielle Biokatalyse von Methan.
Puri et al. (Tue,) haben diese Frage untersucht.