Konstruktion eines Fusionsproteins zwischen Protein A und grünem fluoreszierendem Protein und dessen Anwendung im Western Blot

Das Aequorea-grüne fluoreszierende Protein (GFP) und Protein A wurden fusioniert und in Escherichia coli exprimiert. Das fluoreszierende native Fusionsprotein (PA-GFP) wanderte bei 47 kDa in SDS-PAGE. Das nicht-fluoreszierende denaturierte PA-GFP wanderte jedoch bei 57 kDa, was der theoretischen Molekülmasse entspricht. Obwohl die Gründe für diese Mobilitätsverschiebung zwischen fluoreszierenden und nicht-fluoreszierenden Molekülen unklar bleiben, könnte die kleine Ringstruktur innerhalb der nativen Moleküle ihre Mobilität beeinflussen. Der aus einem E. coli-Stamm, der PA-GFP produziert, hergestellte Zellextrakt wurde in Western und Dot Blots verwendet. Die Sensitivität und Spezifität der PA-GFP-Detektion waren ausreichend für ein schnelles und einfaches Screening.