Quantifizierung von Mikro-RNAs durch Echtzeit-RT-qPCR

Mikro-RNAs (miRNAs) sind ∼22 Nukleotid lange regulatorische RNA-Moleküle, die eine wichtige Rolle bei der Kontrolle von Entwicklungs- und physiologischen Prozessen in Tieren und Pflanzen spielen. Die Messung des miRNA-Expressionsniveaus ist ein kritischer Schritt in Methoden, die die Regulation biologischer Funktionen untersuchen und miRNA-Profile als diagnostische Marker für Krebs und andere Krankheiten verwenden. Obwohl die Quantifizierung dieser kleinen miRNA-Moleküle durch RT-qPCR aufgrund ihrer kurzen Länge und Sequenzähnlichkeit herausfordernd ist, wurden seit 2004 eine Reihe von quantitativen RT-qPCR-basierten Methoden zur Quantifizierung von miRNAs eingeführt. Die am häufigsten verwendeten Methoden sind stem-loop-basierte Reverse Transkription (RT)-TaqMan(®) MikroRNA-Tests und -Arrays. Die hohe Sensitivität und Spezifität, der große dynamische Bereich und der einfache Arbeitsablauf von TaqMan(®) MikroRNA-Tests und -Arrays haben die TaqMan-Analyse zur bevorzugten Methode für die Profilierung der miRNA-Expression und die anschließende Validierung gemacht. Andere Methoden wie poly (A)-Tail-basierte und direkte RT-basierte SYBR-miRNA-Tests werden ebenfalls in diesem Kapitel diskutiert.