Gateway-Vektoren zur Herstellung von kombinatorisch markierten His6-MBP-Fusionsproteinen im Zytoplasma und Periplasma von Escherichia coli

Viele Proteine, die in Form von unlöslichen Aggregaten ansammeln, wenn sie in Escherichia coli überproduziert werden, können durch Fusion mit dem E. coli Maltose-Bindungsprotein (MBP) löslich gemacht werden, was oft ihre Faltung in biologisch aktive Konformationen ermöglicht. Obwohl MBP ein hervorragender Löslichkeitverstärker ist, ist es kein besonders guter Affinitätsmarker für die Proteinreinigung. Um diesen Nachteil auszugleichen, haben wir Gateway-Zielvektoren entwickelt und erfolgreich getestet, um dual His6MBP-markierte Fusionsproteine im Zytoplasma und Periplasma von E. coli herzustellen. Die MBP-Einheit verbessert den Ertrag und die Löslichkeit ihrer Fusionspartner, während das Hexahistidinschild (His-Tag) zur Erleichterung ihrer Reinigung dient. Die Verfügbarkeit eines Vektors, der His6MBP-Fusionsproteine ins Periplasma leitet, erweitert die Nutzbarkeit dieses dualen Taggings auf Proteine, die Disulfidbindungen enthalten oder im bakteriellen Zytoplasma toxisch sind.