Antimikrobielle Peptide aus menschlichen Blutplättchen

Blutplättchen weisen strukturelle und funktionelle Ähnlichkeiten mit Granulozyten auf, die an der antimikrobiellen Wirtsabwehr beteiligt sind. Um die potenziellen antimikrobiellen Aktivitäten von Plättchenproteinen zu bewerten, wurden normale menschliche Blutplättchen in vitro mit humanem Thrombin stimuliert. Die Bestandteile der über die stimulierten Plättchen erhaltenen Überstände wurden durch Umkehrphasen-Hochleistungsflüssigkeitschromatographie zu Homogenität gereinigt. Gereinigte Peptide mit hemmender Aktivität gegen Escherichia coli ML35 in einem Agar-Diffusions-Antimikrobenassay wurden durch Massenspektrometrie, Aminosäureanalyse und Sequenzbestimmung charakterisiert. Diese Analysen ermöglichten die Identifizierung von sieben thrombinfreisetzbaren antimikrobiellen Peptiden aus menschlichen Blutplättchen: Plättchenfaktor 4 (PF-4), RANTES, Das Peptid zur Aktivierung des Bindegewebes 3 (CTAP-3), plättchenbasisches Protein, Thymosin beta-4 (Tbeta-4), Fibrinopeptid B (FP-B) und Fibrinopeptid A (FP-A). Mit Ausnahme von FP-A und FP-B wurden alle Peptide auch aus sauren Extrakten von nicht stimulierten Plättchen gereinigt. Die in vitro antimikrobiellen Aktivitäten der sieben freigesetzten Peptide wurden weiter gegen Bakterien (E. coli und Staphylococcus aureus) und Pilze (Candida albicans und Cryptococcus neoformans) getestet. Jedes Peptid zeigte eine Aktivität gegen mindestens zwei Organismen. Im Allgemeinen waren die Peptide gegen Bakterien potenter als gegen Pilze, die Aktivität war bei sauren pH-Werten größer und die antimikrobielle Aktivität war dosisabhängig. Ausnahmen von diesen Beobachtungen wurden bei PF-4 festgestellt, das in mikrobiziden Assays eine bimodale Dosis-Wirkungs-Beziehung zeigte, und bei Tbeta-4, das bei alkalischen pH-Werten eine höhere Aktivität hatte. Bei Konzentrationen, bei denen sie einzeln subletale Wirkungen hatten, exertierten PF-4 und CTAP-3 synergistische mikrobizide Aktivitäten gegen E. coli. Insgesamt deuten diese Ergebnisse auf eine direkte antimikrobielle Rolle der Blutplättchen hin, da sie aktiviert werden, um Peptide als Reaktion auf Trauma oder Entzündungsmediatoren freizusetzen.