Die Vorbereitung von menschlicher Spermatozoen-RNA für klinische Analysen

Die kürzliche Identifizierung von RNA als Bestandteil reifer Spermatozoen erforderte die Entwicklung eines zuverlässigen Isolationsprotokolls, das in der Lage ist, ein hochqualitatives Substrat zu liefern. Neben den inhärenten Schwierigkeiten bei der RNA-Isolation muss das Verfahren, das auf Spermien angewendet wird, der widerstandsfähigen Natur und dem verminderten RNA-Gehalt dieser Zelltypus Rechnung tragen. Darüber hinaus muss das Protokoll für den klinischen Einsatz geeignet sein. Ein zuverlässiges RNA-Isolationsverfahren, das für diesen einzigartigen Zelltyp optimiert ist, wird beschrieben. Das Ejakulat wird gesammelt, kontaminierende somatische Zellen werden lysiert und dann wird die Spermatozoen-RNA durch Homogenisierung in einem Chaotrop freigesetzt. Die RNA wird dann durch Chromatographie mit einem handelsüblichen Harz aus dem Homogenat gereinigt. Die Qualität der isolierten Proben wird durch PCR und RT-PCR bewertet. Sobald die Reinheit festgestellt ist, sind die Proben für zahlreiche Anwendungen geeignet, einschließlich Amplifikation und Sonden-Synthese. Die zuverlässige und konsistente Isolation von hochqualitativer RNA aus reifen Spermatozoen wird bei der Entwicklung neuer Werkzeuge zur klinischen Beurteilung von männlicher Fertilität helfen.