Protokoll zur Erzeugung von aus iPSC abgeleiteten intestinalen Organoiden durch Dissektion zur Modellierung von Therapien der Zystischen Fibrose

Intestinale Organoide (IOs) sind vielseitige, physiologisch relevante Modelle des menschlichen Darms. In der Forschung zur Zystischen Fibrose helfen IOs bei der Bewertung von CFTR-Korrektoren, Potentiatoren und Translations-Readthrough-Verbindungen. Hier präsentieren wir ein Protokoll zur Erzeugung von aus induzierten pluripotenten Stammzellen (iPSC) abgeleiteten IOs mit hoher phänotypischer Ähnlichkeit zu primärem Material. Wir beschreiben die Schritte zur Etablierung der iPSC-Kultur, zur Erzeugung intestinaler Vorläuferzellen durch gerichtete Differenzierung und zur Reifung dieser intestinalen Vorläuferzellen unter Verwendung von dreidimensionaler Kultur. Anschließend detaillieren wir die Verfahren zur Etablierung von Kulturen intestinaler Organoide aus diesen Vorläuferzellen mithilfe dissektionsbasierter Techniken. • Schritte zur Vorbereitung von iPSC-Kulturen für die gerichtete Differenzierung zu intestinalen Vorläuferzellen • Anweisungen zur Erzeugung intestinaler Vorläuferzellen aus iPSCs • Richtlinien zur Reifung intestinaler Vorläuferzellen in Richtung DiO-Linien • Hinweise zur Kultur und zum Erhalt von DiO-Linien. Hinweis des Herausgebers: Die Durchführung eines experimentellen Protokolls erfordert die Einhaltung lokaler institutioneller Richtlinien für Laborsicherheit und Ethik.